抗体人源化步骤
抗体人源化步骤热心网友:推荐“人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略”看下摘 要:目的在人源化抗体构建过程中,采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2/0内源性畸形轻链转录本以
热心网友:推荐“人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略”看下摘 要:目的在人源化抗体构建过程中,采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2/0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时,不用常规的TRIZOL法抽提总RNA,而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit,将polyA^+的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量,提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^+RNA。采用RT-PCR,我们成功地克隆到了轻链可变区序列,序列分析证实读码框完全正确,属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征,具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^+ mRNA富集技术,成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb(4F1)单克隆抗体的轻链、重链可变区基因,成功地消除了SP2/0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。
###热心网友:(一)嵌合抗体 方法: 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因,与人Ig恒定区基因连接,插入适当表达载体,转染宿主细胞,表达人-鼠嵌合抗体 特点: 减少了鼠源性抗体的免疫原性 保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力 (二)改型抗体 定义:指利用基因工程技术,将人抗体可变区(V)中互补决定簇(CDR)序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”,因其主要涉及CDR的“移植”,又可称为“CDR移植抗体 意义:多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗好吧,解释一下,所谓嵌合抗体,就是利用DNA重组技术将鼠单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中,转化哺乳动物细胞表达出人鼠嵌合抗体,这样表达的抗体分子中轻重链的V区是鼠源的,而C区是人源的,这样整个抗体分子的近2/3部分都是人源的,大大降低了原有单抗中鼠源蛋白的免疫原性。
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