中华人民共和国国家标准《水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法》

【专家解说】：1 适用范围 本标准适用于水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定。 2 参考标准 GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉测定法》 GB3523—83《谷类、油料作物种子水分测定法》 3 测定原理 淀粉与碘形成碘—淀粉复合物，并具有特殊的颜色反应。支链淀粉与碘生成棕红色 复合物，直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。在淀粉总量不变条件下，将这两种淀粉分散 液按不同比例混合，在一定的波长和酸度条件下与碘作用，生成由紫红到深蓝一系列颜 色，代表其不同直链淀粉与支链淀粉含量比例，根据吸光度与直链淀粉浓度呈线性关 系，可用分光光度计测定。 4 仪器、设备 4.1 粉碎机（实验室用旋风磨）。 4.2 分光光度计：721型或具有相同性能的其他型号。 4.3 分析天平：感量 0.0001g。 4.4 玻璃仪器：50ml具塞刻度试管，100ml容量瓶。 5 试剂配制 除注明者外均为分析纯，水为蒸馏水。 5.1 氢氧化钠（GB629—81），lmol.L-1、0.09mol，L-1水溶液，准确标定。 5.2 冰乙酸（GB676—78），1mol L-1水溶液，准确标定。 5.3 碘贮备溶液及碘试剂：称 2g碘和 20g碘化钾（GB1272—77）用蒸馏水溶解并稀释 至 100ml，即为碘贮备液。取 10ml碘贮备液稀释至 100ml，即为碘试剂。 5.4 马铃薯直链淀粉标准溶液：1mg/ml，取烘干（55-56℃ 真空干燥）的马铃薯直链 淀粉纯品，称取重量相当于含 0.1000g淀粉，放入 100ml容量瓶中，加入 1ml无水乙醇 湿润样品，再加 9mlmol·L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴分散 10min，迅速冷却后，用水定 容。 5.5 支链淀粉标准溶液：1mg/ml，选择与待测谷物样品相应的蜡质谷物标准品，称取 重量相当于含 0.1000g粗淀粉，放入 100ml容量瓶中，加 1ml无水乙醇，再加 9ml1mol· L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴加热 10min，迅速冷却后，用水定容。 5.6 石油醚（HG3—1003—76），沸程 60-90 。 6 样品的选取和制备 6.1 将样品挑选干净（谷子脱壳、稻谷制成精米），按四分法取样 20g。 6.2 用粉碎机将样品粉碎，全部通过 0 177mm孔径筛（80号），混匀装入磨口瓶备用。 7 测定步骤 7.1 混合校准曲线绘制 取 6个 100ml容量瓶，分别加入 1mg/ml马铃薯直链淀粉标准溶液 0、0.25、0.50、 1.00、1.50、2.00ml，再依次加入1mg/ml支链淀粉标准溶液 5、4.75、4.50、4.00、 3.50、3.00ml，总量为 5ml。另取 1个 100ml容量瓶，加入 0.09mo1.L-1氢氧化钠溶液 5ml作空白。然后于各瓶中依次加入约 50ml水、1ml1mol·L-1乙酸及 1ml碘试剂。用水 定容后显色 10min，在 620nm处读取吸光度。 以直链淀粉毫克数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线或建立回归方程。 7.2 样品测定 7.2.1 按 GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉测定法》和 GB3523—83《谷类、油料作物种 子水分测定法》测定样品的粗淀粉含量和水分。 7.2.2 样品分散：称取相当于 0.1000g粗淀粉的样品（如按样品干重计算直链淀粉百分 含量时，称取样品 100mg）于 100ml容量瓶中，加 1ml无水乙醇，充分湿润样品，再加 入 9ml1mol.L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴中分散 10min，迅速冷却，用水定容。 7.2.3 脱脂：取 20ml分散液于 50ml具塞刻度试管中，加入 7-10ml石油醚，间歇摇动 10min，静止 15min，分层后用连接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚层。重复以上 操作 2-5次（精米脱脂二次，玉米、谷子须脱脂三次）。 7.2.4 测定：吸取脱脂后的碱分散液 5.00ml于 100ml容量瓶中，加水 50ml，再加入 lmol L-1乙酸溶液 1ml及碘试剂 1ml，用水定容。显色 10min后，在 620nm处读取吸光 度。 注：测定样品与绘制校准曲线时的温度相差不能超过 1 。 8 结果计算 8.1 计算公式 a.直链淀粉（%，占淀粉总量）按式（1）计算： G×100 直链淀粉（%，占淀粉总量） =-------×100…………………………………（1） m1×5 b.直链淀粉（%，占样品干重）按式（2）计算： G×100 直链淀粉（%，占样品干重） = -----------------×100………………………（2） m2× 5× （1-H） 式中： G——从相应的混合校准曲线或回归方程求出的直链淀粉质量，mg； m1——称取样品中所含粗淀粉的质量，100mg； m2——称取样品的质量，100mg； H——水分百分率。 8.2 结果表示 两个平行测定的结果，用算术平均值表示。保留小数点后两位。第三位数的舍入见 GB1.1—81《标准化工作导则 编写标准的一般规定》附录 C。 8.3 结果的允许误差 两个平行测定值的相对误差，不得超过 2%。 附 录 A 马铃薯直链淀粉纯品制备方法 （参考件） A.1 仪器、设备 A.1.1 离心机（4000r/min）。 A.1.2 电动搅拌器。 A.1.3 冰箱。 A.1.4 真空干燥箱。 A.1.5 磁力搅拌器。 A.1.6 232型甘汞电极或具有相同性能的其他型号。 A.1.7 213型铂电极或具有相同性能的其他型号。 A.1.8 0-1.000V毫伏表。 A.2 试剂 除注明者外，均为分析纯，水为蒸馏水。 A.2.1 氢氧化钠（GB629—81），0.5mol·L-1水溶液。 A.2.2 盐酸（GB622—77），1mol.L-1、1.5mol.L-1、2mol.L-1水溶液。 A.2.3 正丁醇（HG3—1012—76）。 A.2.4 异戊醇（HG3—996—76）。 A.2.5 碘酸钾标准溶液：称取 0.1784g碘酸钾（GB651—77，优级纯）用水溶解后，转 入 1000ml容量瓶中用水定容，即 8.34×10-4mo1.L-1。 A.2.6 碘化钾溶液：称取66.40g碘化钾（GB1272—77）用水稀释至1000ml，即0.4moL-1。 A.3 制备方法 称取马铃薯淀粉 10g，加少量无水乙醇使样品湿润，再加入 350m10.5mol.L-1氢氧化 钠，放入沸水浴加热搅拌 20min至完全分散，冷却，以 4000r/min离心 20min，取上清液 用 1.5moI·L-1盐酸调至 pH6.5（用 pH精密试纸），然后加入 1.1（ V/V）丁醇 -异戊醇 80ml，在沸水浴中加热搅拌 10min，冷却至室温。移入冰箱内（2-4 ）静置 24h去掉上层 污物层，以 4000r/min离心 15min，弃掉上清液，沉淀物即为粗直链淀粉。 用饱和正丁醇水溶液洗涤沉淀物（粗直链淀粉），4000r/min离心 15min，将沉淀物 转入 200ml饱和正丁醇水溶液中，在沸水浴中加热溶解（10-15min），冷却至室温，放 入冰箱内（2-4 ）24h，弃去上层污物层，以 4000r/min离心 15min，沉淀物再加 200ml 饱和正丁醇水溶液加热溶解，反复纯化三次。最后沉淀物用无水乙醇反复洗涤离心 3- 4次，在真空干燥箱中（55-56 ）干燥。即得直链淀粉纯品。 A.4 纯品质量鉴定 A.4.1 淀粉含量测定 称 0.1000g纯品加入 10m10.5mol·L-1氢氧化钠在沸水浴中加热分散，再加入21.5ml2mol ·L-1盐酸，在沸水浴回流水解 2h，用费林氏液法（GB5513—85《粮食、油料检验 还 原糖和非还原糖测定法》）测定还原糖，乘以 0.9即得淀粉量，计算纯品含量。 A.4.2 碘 -淀粉复合物吸收光谱测定 取5.4溶液 2ml（1mg/ml直链淀粉）及 0.09mol·L-1氢氧化钠溶液 3ml加 50ml水稀 释后，再加入 1mol·L-1乙酸溶液 1ml和碘试剂 1ml，用水定容至 100ml，显色 10min，于 分光光度计测定 500-800nm的吸收谱。 A.4.3 碘结合量测定 A.4.3.1 测定 称取重量相当于含 0.1000g淀粉的烘干马铃薯直链淀粉纯品于 100ml容量瓶中，加几滴 无水乙醇湿润后再加入 0.5mol·L-1氢氧化钠溶液 10ml，置沸水浴完全分散，冷却、加水定 容。吸 5ml（含直链淀粉 5mg）分散液放入 200ml烧杯中，加入 85ml水，5ml1mol·L-1盐酸 及5ml0.4mol·L-1碘化钾溶液，按电位滴定装置要求，把烧杯置于电磁搅拌器上，将铂电极 及甘汞电极插入液面下，在电磁搅拌下，用 5mi微量滴定管滴加碘酸钾标准溶液，每次滴加 0.2ml（或 0.1ml），加后 1min读取毫伏数，滴定终点用二次微商法计算。 A 4.3.2 计算 0.6346 直链淀粉碘结合量，% =-------×T×100 m 式中：m——直链淀粉质量，mg； T——8.34×10-4mol·L-1碘酸钾溶液滴定体积，ml； 0.6346——每毫升 8.34×10-4mol.L-1碘酸钾溶液相当于碘的质量，0.6346mg。 A.4.4 马铃薯直链淀粉纯品标准 马铃薯直链淀粉纯品必须具备：a.λmax为 640-650nm；b 淀粉含量在 85%以上；c 碘结 合量在 19.5以上；d.A0.002%，λmax在 20℃时为340以上。 1cm 附 录 B 水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品的选择与制备 （参考件） B.1 碘 -淀粉复合物吸收光谱测定 取 5.5溶液 5ml（1mg/mL支链淀粉），加 50ml水稀释后，再加入 1mol·L-1乙酸溶液 1ml和碘试剂 1ml，加水至 100ml，显色 10min，用分光光度计测定 400-640nm的吸收谱。 B.2 标准品的选择 水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品可以从相应的蜡质谷物品种中选择，标准品必须 分别具备： 水稻：λmax520-530nm，A0.005%， 620nm，在20℃时为17以下； 1cm 玉米：λmax520-530nm，A0.005%， 620nm，在20℃时为25以下； 1cm 谷子：λmax530-540nm，A0.005%， 620nm，在 20℃时为22以下。 1cm B.3 标准品制备 取适量（10-20g）通过 0.177-0.149mm孔径筛（80-100号）的蜡质谷粉，分别 用甲醇及石油醚在索式脂肪抽提器回流脱脂 16h，放入真空干燥箱烘干（55-56℃）备 用，同时按 GB5006—85测定淀粉含量。