提炼胆固醇

胆固醇的
1  主题内容与适用范围
    本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。
    本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。
2  原理
    当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。 因此可先
对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品胆固醇的含量。
3  试剂
    全部试剂除注明外均为分析纯，试验用水为蒸馏水。
3.1  石油醚。
3.2  无水乙醇。
3.3  浓硫酸。
3.4  冰乙酸：优级纯。
3.5  磷酸。
3.6  胆固醇标准物质。
3.7  胆固醇标准液。
3.7.1 胆固醇标准储备液（1mg/mL）：精确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定
容至100mL。此液至少在2个月内保持稳定。
3.7.2  胆固醇标准常备液（100(g/mL）：吸取胆固醇标准储备液10mL，用冰乙酸定
容至100mL。此液用时临时配制。
3.8 铁钒显色剂。
3.8.1铁钒储备液：溶液4.463g硫酸铁铵〔FeNH4(SO4)2•H2O〕于100mL85％磷酸中，
贮于干燥器内，此液在室温中稳定。
3.8.2  铁钒显色液：吸取铁钒储备液10mL，用浓硫酸定容至100mL。贮于干燥器内，
以防吸水。
3.9  50％氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
3.10   5％氯化钠溶液：称取5g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
3.11  钢瓶氮气：纯度99.99％。
4  仪器和设备
4.1  实验室常用设备。
4.2  721型分光光度计。
4.3  电热恒温水浴。
4.4  电动振荡器。
4.5  具玻塞试管：体积100ml、25mL。  
5  操作步骤
5.1  胆固醇标准线
    吸取胆固醇标准常备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别置于10mL试管内，在各
管内加入冰乙酸使总体积皆达4mL。沿管壁加入2mL铁钒显色液，混匀，在15～90min
内，在560～575nm波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐标， 吸光度之为纵坐标做
标准曲线。
5.2  样品测定
5.2.1  食品脂肪的提取与测定
    根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。 并计
算出每100g食品中的脂肪含量。
5.2.2  食品胆固醇的测定
    将提取的油脂3～4滴（约含胆固醇300～500mg ），置于25mL试管内，准确记录其重量。加入4mL无水乙醇，0.5mL50%氢氧化钾溶液，在65℃恒温水浴中皂化1h。皂化时每隔20～30min振荡一次使皂化完全。皂化完毕，取出试管，冷却。加入3mL5％氯化钠溶液，10mL石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡器上振摇2min， 静置分层（一般
约需1h以上）。
    取上层石油醚液2mL，置于10mL具玻塞试管内，在65℃水浴中用氮气吹干，加入
4mL冰乙酸，2mL铁钒显色液，混匀，放置15min后在560～575nm波长下比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。
6  结果计算
              m×V×c             1 
         X＝———————— ×————
              V1×m1             1000    
式中： X—样品中胆固醇含量，mg/100g；
          m—测得的吸光度值在胆固醇标准线上显示的胆固醇含量，mg ；
           V—石油醚总体积，mL；
         v1—取出的石油醚体积，mL；
        m1—称取食品油脂样品量，g；
           c—食品样品油脂含量，g/100g；
  1/1000—折算成每100g食品中胆固醇毫克数。
7  平均允许误差
    同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10％。
8  标准曲线
               0.60├
                   │
               0.50├  
                   │
               0.40├
                   │
               0.30├
                   │
              0. 20├
                   │
               0.10├                                      
                   │                                      
              0. 00└————┴————┴————┴————┘
                    0        50       100       150       200mg
                                 胆固醇标准曲线
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     测定时间         │            │            │
胆固醇，mg           │   1985     │    1990    │   1991
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    50                │   0.132    │     0.130   │   0.130
    100               │   0.255    │     0.260   │   0.255
    150               │   0.390    │     0.390   │   0.390
    200               │   0.515    │     0.510   │   0.513
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  注：表中每个值均为三个测定值的平均值。