东北地区秸秆降解工程菌的选育及速腐菌剂的研制
东北地区秸秆降解工程菌的选育及速腐菌剂的研制【摘要】:我国年产秸秆总量已经超过了7亿吨,居世界第一位,由于缺乏有效的处理手段大量的秸秆被露天焚烧,造成了环境污染,浪费了宝贵的生物资
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S141.4
【目录】:
- 摘要4-6
- Abstract6-12
- 第一章 前言12-31
- 1.1 概述12
- 1.2 东北地区秸秆综合利用现状12-15
- 1.3 秸秆速腐菌剂的研究进展15-18
- 1.4 降解木质纤维素类微生物菌种选育的研究进展18-20
- 1.5 木聚糖酶及pGAP-毕赤酵母表达系统研究进展20-24
- 1.6 纤维素酶及原生质体融合育种研究进展24-25
- 1.7 粟酒裂殖酵母表达系统及35S启动子的研究进展25-27
- 1.8 秸秆速腐菌剂的功能鉴定技术研究进展27-29
- 1.9 研究的目的及意义29-31
- 第二章 秸秆降解菌菌种选育31-83
- 2.1 秸秆降解菌株的自然分离与鉴定31-42
- 2.1.1 材料与方法31-35
- 2.1.1.1 材料、培养基、试剂、仪器31-32
- 2.1.1.2 纤维素降解菌的筛选32
- 2.1.1.3 秸秆降解菌酶活测定32-33
- 2.1.1.4 秸秆降解菌菌株的鉴定33-35
- 2.1.2 结果与分析35-42
- 2.1.2.1 纤维素降解菌的筛选结果35-36
- 2.1.2.2 纤维素酶活测定结果36-37
- 2.1.2.3 菌株的形态学检测结果37-38
- 2.1.2.4 分子生物学鉴定结果38-42
- 2.2 构建高效表达木聚糖酶的毕赤酵母菌株42-60
- 2.2.1 材料与方法43-54
- 2.2.1.1 材料、试剂、培养基、仪器43-44
- 2.2.1.2 克隆木聚糖酶xynB基因44-47
- 2.2.1.3 构建重组表达载体及鉴定47-49
- 2.2.1.4 pGAPz-xynB重组质粒转化毕赤酵母49-51
- 2.2.1.5 重组工程菌的鉴定51-53
- 2.2.1.6 重组工程菌的酶活测定53-54
- 2.2.2 结果与分析54-60
- 2.2.2.1 木聚糖酶基因xynB的克隆54-56
- 2.2.2.2 重组表达载体的鉴定56-58
- 2.2.2.3 重组毕赤酵母工程菌鉴定58-59
- 2.2.2.4 DNS法测定重组工程菌酶活59-60
- 2.3 原生质体融合获得高产纤维素酶菌株60-71
- 2.3.1 材料与方法60-64
- 2.3.1.1 菌株、培养基、试剂、仪器60-61
- 2.3.1.2 菌种保存与选择61
- 2.3.1.3 原生质体的制备与再生61-62
- 2.3.1.4 原生质体的初级诱变、融合与筛选62
- 2.3.1.5 纤维素酶活测定62-63
- 2.3.1.6 融合子的遗传稳定性检验及鉴定63-64
- 2.3.2 结果与分析64-71
- 2.3.2.1 原生质体的制备与再生64-66
- 2.3.2.2 原生质体的初级诱变、融合、筛选66-68
- 2.3.2.3 融合子产酶量、稳定性检验及融合子的鉴定68-71
- 2.4 构建高效表达纤维素酶的粟酒裂殖酵母菌株71-81
- 2.4.1 材料与方法71-77
- 2.4.1.1 材料、培养基、试剂、仪器71-72
- 2.4.1.2 35S.EGI.NOS基因的克隆72-73
- 2.4.1.3 粟酒裂殖酵母重组表达载体的构建及鉴定73-75
- 2.4.1.4 粟酒裂殖酵母重组表达载体质粒DNA的转化与鉴定75-77
- 2.4.1.5 重组酵母转化子的刚果红染色筛选及酶活测定77
- 2.4.2 结果与分析77-81
- 2.4.2.1 目的基因的克隆与表达载体的构建78-79
- 2.4.2.2 重组粟酒裂殖酵母筛选与鉴定79-80
- 2.4.2.3 纤维素酶基因在粟酒裂殖酵母中的表达80-81
- 2.5 小结与讨论81-83
- 第三章 秸秆降解菌复合菌剂的制备与功能鉴定83-109
- 3.1 构建秸秆降解菌复合菌剂及其功能鉴定83-102
- 3.1.1 材料与方法84-90
- 3.1.1.1 菌种、培养基、试剂、仪器84-85
- 3.1.1.2 复合菌剂的组合筛选85-86
- 3.1.1.3 利用堆肥对秸秆速腐菌复合菌剂进行功能验证86-87
- 3.1.1.4 温度及pH测定87
- 3.1.1.5 微生物数量测定87
- 3.1.1.6 有效养分的测定87-90
- 3.1.2 结果与分析90-102
- 3.1.2.1 菌株间的拮抗关系测定及复合菌剂构建结果90-91
- 3.1.2.2 温度及pH值的测定结果与分析91-93
- 3.1.2.3 微生物数量测定与分析93-97
- 3.1.2.4 有效养分的测定结果与分析97-102
- 3.2 秸秆速腐菌活性干粉生产工艺优化及干燥剂的选择102-107
- 3.2.1 材料与方法102-104
- 3.2.1.1 菌种、培养基、试剂、仪器103
- 3.2.1.2 CMAP制备及参数检测103-104
- 3.2.1.3 干燥温度对活菌率的影响104
- 3.2.1.4 筛选干燥保护剂104
- 3.2.2 结果与分析104-107
- 3.2.2.1 干燥温度试验结果与分析105
- 3.2.2.2 筛选干燥保护剂试验结果与分析105-106
- 3.2.2.3 正交试验优化干燥保护剂的组合结果与分析106-107
- 3.3 小结与讨论107-109
- 第四章 结论与展望109-111
- 参考文献111-119
- 附录119-124
- 致谢124-125
- 个人简介125
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