芦蒿秸秆黄酮分离纯化及抑制AGEs形成活性研究

【摘要】：芦蒿,菊科蒿属植物,具有药食两用性,在南京八卦洲地区大面积种植。作为蔬菜,人们以采食冬春季的芦蒿嫩茎为主,而老茎、叶及秋季的芦蒿秸秆因缺乏精深加工技术而无法利用。为推进芦蒿资源的综合利用和促进传统中药的进一步发展,本研究以农产品废弃物芦蒿秸秆为材料,通过75%乙醇提取、柱层析分离和现代的化学结构鉴定方法,对分离得到的化合物进行结构鉴定,并对芦蒿秸秆的提取物和化合物单体进行抑制糖基化终末产物(AGEs)形成的效应研究。主要研究结果如下：1通过对NKA-Ⅱ, AB-8, HPD417, DM130, D101, HPD826, ADS-17,聚酰胺8种树脂静态吸附和解吸性能的对比,选择吸附和解吸性能良好的AB-8大孔吸附树脂进行吸附洗脱条件的优化。确定芦蒿秸秆总黄酮富集纯化的最佳吸附洗脱条件为：pH4.0,上样浓度1.476mg/mL,上样流速1mL/min,上柱体积为树脂体积的2.5倍,洗脱剂为体积分数60%的乙醇,洗脱流速1mL/min,最大洗脱体积为1.5-2.0BV左右。经纯化后,产品中总黄酮的纯度由5.80%增加到30.26%,提高了5.2倍。由此可见,AB-8树脂是芦蒿秸秆总黄酮良好的纯化剂,达到了富集纯化的目的,具有一定的推广应用价值。2利用多种分离技术,包括大孔树脂、硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)、Sephadex LH-20等柱层析技术,从芦蒿秸秆提取物中分离化合物单体,并通过化学方法和波谱技术,包括液质联用、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HMQC确定了4种化合物和一组同分异构体的化学结构。分别为化合物1、山奈酚-3-O-葡萄糖酸、芦丁、木犀草素；同分异构体为3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸。其中化合物1为新化合物,除芦丁和木犀草素外,其他化合物首次从芦蒿中分离得到。3将黄酮含量最高的AB-8洗脱组分(30%乙醇洗脱物、50%乙醇洗脱物)进行分离纯化,得到2种黄酮单体：木犀草素和芦丁。实验数据显示,木犀草素和芦丁对AGEs的形成具有很好的抑制作用,在浓度为2.5mmol/L时,芦丁对BSA-MGO形成的AGEs的抑制率达到89%,对BSA-GO形成的AGEs的抑制率为77%；木犀草素在浓度为lmmol/L时,对BSA-MGO形成的AGEs抑制率为81%。木犀草素在低浓度下,仍具有较强的捕获二羰基化合物的能力,说明其可以作为AGEs的天然抑制剂来预防和减轻糖尿病及糖尿病并发症。4芦蒿秸秆总黄酮浸膏经AB-8树脂分离后共收集到4组含有黄酮的洗脱液(F-10(10%乙醇洗脱物)、F-30(30%乙醇洗脱物)、F-50(50%乙醇洗脱物)、F-70(70%乙醇洗脱物)),各分离的洗脱组分对AGEs的形成均具有抑制作用,抑制效果为F-50F-30F-10F-70,此结果与F-30和F-50分别含有的主要黄酮成分芦丁和木犀草素具有较好的AGEs抑制效果相一致。同时发现芦蒿秸秆对AGEs形成的抑制效果与总黄酮含量存在显著的线性关系。由此,推断F-50组分因其优良的抑制AGEs活性可以应用于保健食品的工业化生产中。 【关键词】：芦蒿秸秆 黄酮 分离纯化 结构鉴定 糖基化终末产物(AGEs)
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TS201.21
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 绪论10-21
• 1.1 芦蒿的研究进展10-16
• 1.1.1 芦蒿的简介及分布10
• 1.1.2 芦蒿化学成分研究进展10-13
• 1.1.3 芦蒿生物活性研究进展13-14
• 1.1.4 芦蒿活性成分的分离纯化方法14-16
• 1.1.5 芦蒿开发应用前景16
• 1.2 糖基化终末产物研究进展16-20
• 1.2.1 糖基化终末产物(AGEs)简介16-17
• 1.2.2 AGEs与疾病关系及病理研究17-18
• 1.2.3 活性二羰基化合物对机体的影响18-19
• 1.2.4 天然AGEs抑制剂19-20
• 1.3 立题依据与意义20
• 1.4 主要研究内容20-21
• 第2章 大孔吸附树脂分离芦蒿秸秆黄酮类化合物21-39
• 2.1 材料和方法21-27
• 2.1.1 材料与试剂21
• 2.1.2 仪器与设备21-22
• 2.1.3 实验方法22-27
• 2.2 结果与分析27-38
• 2.2.1 芦丁标准曲线的绘制27
• 2.2.2 大孔吸附树脂静态实验27-29
• 2.2.3 AB-8树脂动态吸附-解吸实验29-32
• 2.2.4 芦蒿秸秆黄酮类化合物初步鉴定32-38
• 2.3 结论38-39
• 第3章 芦蒿秸秆活性成分分离纯化39-55
• 3.1 材料和方法39-43
• 3.1.1 仪器和填料39-40
• 3.1.2 试剂40
• 3.1.3 材料40
• 3.1.4 实验方法40-43
• 3.2 结果与分析43-54
• 3.2.1 化合物1结构鉴定43-45
• 3.2.2 化合物2结构鉴定45-48
• 3.2.3 化合物3的结构鉴定48-49
• 3.2.4 化合物4结构鉴定49-51
• 3.2.5 组分A化学成分鉴定51-54
• 3.3 结论54-55
• 第4章 芦蒿秸秆活性成分抑制AGEs的效应研究55-61
• 4.1 材料与方法56-57
• 4.1.1 材料和仪器56
• 4.1.2 实验方法56-57
• 4.2 结果与分析57-60
• 4.2.1 芦丁、木犀草素对AGEs的抑制作用57-58
• 4.2.2 芦蒿秸秆AB-8树脂梯度洗脱物对AGEs的抑制作用58
• 4.2.3 总黄酮含量对AGEs抑制效果的影响58-60
• 4.3 结论60-61
• 结论与展望61-63
• 参考文献63-70
• 附录70-74
• 在读期间发表的学术论文及研究成果74-75
• 致谢75

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