作物秸秆的微生物降解研究

【摘要】： 本研究利用微生物降解秸秆以修复退化黑土。利用微生物降解秸秆直接还田既能减少秸秆浪费造成的环境污染,又能修复退化黑土,有利于发展绿色农业、促进农业的可持续发展。主要研究内容是寻找既能降解秸秆的微生物,包括分离降解秸秆的真菌、细菌和放线菌;对菌株的降解能力进行定性和半定量分析;试验添加剂对降解效果的影响;试验菌株混合降解效果以及混合后菌株间的竞争性;选取降解秸秆的丝状真菌进行盆栽试验检验其对玉米发芽和苗期生长的影响;试验优良菌株的固体发酵效果。研究得到一批具有降解秸秆和玉米促生的双功能菌,提出秸秆程序性降解新方式。具体研究方法及研究内容如下: 建立了一种新的简单的分离降解秸秆的丝状真菌的方法,用此方法从东北寒地黑土中分离出真菌56株,其中丝状真菌46株。这种分离方法简述为:秸秆用土壤或者堆肥浸渍至接近腐烂,用酒精对接近腐烂秸秆进行表面灭菌,用土豆葡萄糖琼脂培养基培养并分离秸秆中微生物,这些分离的微生物大多为产丝真菌。用添加或者不添加硝酸铵、酵母粉和黑土浸液等辅助物的秸秆粉制成不同培养基,这些培养基用来比较其对分离的微生物的生长的影响。结果表明同一微生物在不同培养基中生长区别很小,同一培养基不同微生物生长区别较大,具有多样性。选择了只含秸秆粉而不添加辅助物的培养基作为微生物是否降解秸秆的定性培养基,对分离的56株真菌以水稻、大豆和玉米三种秸秆进行降解定性鉴定,结果显示:该方法筛选的46株丝状真菌都能降解三种供试秸秆。 用稻草、大豆和玉米三种干燥秸杆粉碎而成的秸秆粉部分代替LB(一种常用细菌培养基)、高氏培养基中的碳源成分,以此配成液体培养基,用猪粪、牛粪、马粪与黑土混合的土壤作为土样来直接接种,通过延长培养时间来分别富集培养能降解秸杆的细菌、放线菌,用传统的稀释涂平皿挑取单菌落的分离方法,通过菌落形态差异分离出细菌29株,放线菌29株。同时发现大豆秸杆能富集到较多的放线菌,稻草能富集到较多的细菌。根据试验中的平皿中的菌落数计算出菌液中的活菌数浓度。用秸秆粉培养基定性鉴别法对分离的细菌、放线菌进行秸秆的降解的定性鉴别,结果表明:分离的29株细菌中有8株能降解秸秆,分离的29株放线菌中有10株能降解秸秆。选取能降解秸秆的14株菌比较它们在三种秸秆粉培养基上的生长情况,发现供试14株菌都能利用三种秸秆生长,同一菌株在不同秸秆粉培养基上生长的菌落差异较大。测试了硝酸铵、酵母粉和土液等添加物对能降解秸秆的3株细菌和9株放线菌在秸秆粉培养基上的生长影响,结果表明:酵母粉对细菌的生长具有明显促进作用,其它添加物对供试菌的生长影响较小。 选取降解秸秆较快且形态差异较大的10株丝状真菌,以玉米秆芯为材料,研究其降解秸秆的协同性。结果表明:供试10株丝状真菌在侵入秸秆内部后都具有排斥其他丝状真菌侵入的倾向。利用平板对峙法研究这10株丝状真菌在培养基PDA上生长的相互影响,结果表明供试10株丝状真菌也普遍具有相互竞争和抑制的作用,没有发现促进生长现象。根据菌落形态、菌丝和孢子形态对10株丝状真菌鉴定到属。在这10株真菌中,有三株(F1、F7、F10)是循环抑制,分类学上分别归属于Mucor,Phytium和Phytophthora。结果表明侵入秸秆内10株丝状真菌阻止外源真菌入侵。 盆栽试验研究了接种44株可以降解秸秆的丝状真菌对玉米发芽和苗期生长的影响。结果表明:八株真菌F6、F7、F9、F11、F16、F17、F18和F36可显著(P0.05,后同)降低玉米发芽率,其中极显著两株为F6和F36,分别降低45.0%和32.5%;真菌F36同时也显著降低单株生物量,降低率为48.0%;两株真菌F5和F45可显著提高玉米苗期单株生物量,分别提高35.0%和48.0%。真菌F5和F45经初步鉴定分别为Fusarium sp.和Trichoderma sp.。结论:降解秸秆丝状真菌Fusarium sp.(F5)和Trichoderma sp(F45)显著促进玉米苗期生长。 理论分析表明:可以侵入致密秸秆内部的丝状真菌都能一定程度上降解秸秆,依附于秸秆表面的微生物可能与秸秆的降解有关。依附于秸秆表面的真菌可以通过PDA培养基展示出来,方法是将秸秆片段置于PDA培养基上培养数天,在秸秆表面原位就能见到依附于秸秆的真菌菌落,在秸秆处于潮湿环境下也能展示出表面依附的真菌。根据丝状真菌在PDA和秸秆内的竞争性结果,半腐烂秸秆表面出现块状色斑的实验现象,以及土壤中半腐烂秸秆内只能分离到少量种类真菌的实验结果,分析了土壤中降解秸秆微生物的演替过程。 【关键词】：秸秆 降解 丝状真菌 细菌 放线菌
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：S141.4
【目录】：

• 摘要10-12
• Abstract12-15
• 1 引言15-35
• 1.1 国内外研究进展15-17
• 1.1.1 国内研究进展15-16
• 1.1.2 国外研究进展16-17
• 1.2 秸秆资源及秸秆的微生物降解综述17-29
• 1.2.1 秸秆是一种资源17-21
• 1.2.2 秸秆资源统计21-22
• 1.2.3 秸秆资源的综合利用22-24
• 1.2.4 秸秆的微生物降解综述24-29
• 1.3 本研究的目的意义29-32
• 1.3.1 本研究的背景29
• 1.3.2 领域存在的不足和问题29-30
• 1.3.3 本研究的目的意义30-31
• 1.3.4 本研究可行性评价31-32
• 1.4 本研究的主要内容32-35
• 1.4.1 降解秸秆的真菌的分离32-33
• 1.4.2 降解秸秆的细菌和放线菌的分离33
• 1.4.3 摸索降解性能并优化降解条件33
• 1.4.4 秸秆的固体发酵33
• 1.4.5 田间试验33-34
• 1.4.6 菌株鉴定34-35
• 2 材料与方法35-44
• 2.1 降解秸秆的丝状真菌的分离和定性35-37
• 2.1.1 材料35
• 2.1.2 方法35-37
• 2.2 从土壤中分离降解秸秆的细菌和放线菌37-39
• 2.2.1 材料37-38
• 2.2.2 方法38-39
• 2.3 秸秆内丝状真菌阻止外源真菌入侵39-40
• 2.3.1 材料39
• 2.3.2 方法39-40
• 2.4 接种降解秸秆的真菌对玉米苗期生长的影响40-41
• 2.4.1 材料40-41
• 2.4.2 方法41
• 2.5 秸秆表面及内部真菌展示41-42
• 2.5.1 材料41-42
• 2.5.2 方法42
• 2.6 灭菌秸秆的发酵效果42-44
• 2.6.1 材料42
• 2.6.2 方法42-44
• 3 结果与分析44-66
• 3.1 降解秸秆的丝状真菌的分离和定性44-47
• 3.1.1 降解秸秆的真菌的分离44
• 3.1.2 降解秸秆定性培养基选择与比较44-46
• 3.1.3 降解秸秆定性试验46-47
• 3.2 土壤中降解秸秆的细菌和放线菌的分离和筛选47-52
• 3.2.1 富集培养菌液的稀释测活菌数47-48
• 3.2.2 细菌和放线菌的分离48
• 3.2.3 两株放线菌和6 株细菌在秸杆和不同添加物配成的培养基上的生长情况48-49
• 3.2.4 对分离的细菌和放线菌进行降解秸杆定性试验49-50
• 3.2.5 对降解秸杆的细菌和放线菌分别用3 种秸秆粉培养基进行比较试验50-51
• 3.2.6 降解秸杆的12 株细菌和放线菌在秸秆粉及添加物培养基上生长比较51-52
• 3.3 秸秆内丝状真菌阻止外源真菌入侵52-55
• 3.3.1 秸秆内丝状真菌的分离与分析52
• 3.3.2 十株丝状真菌在玉米秸秆秆芯内的竞争52-53
• 3.3.3 十株丝状真菌在PDA 上的竞争53-54
• 3.3.4 十株供试真菌的鉴定54-55
• 3.4 接种降解秸秆的真菌对玉米苗期生长的影响55-64
• 3.4.1 接种18 株真菌对玉米发芽率和苗期生长的影响55-59
• 3.4.2 接种26 株真菌对玉米发芽率和苗期生长的影响59-63
• 3.4.3 菌株鉴定结果63-64
• 3.5 秸秆表面及内部真菌展示64-65
• 3.5.1 秸秆表面及内部真菌展示64
• 3.5.2 秸秆在土壤中降解的演替过程分析64-65
• 3.6 灭菌秸秆的发酵效果65-66
• 4 讨论66-76
• 4.1 降解秸秆的丝状真菌的分离和定性66-67
• 4.2 土壤中降解秸秆的细菌和放线菌的分离67-68
• 4.3 秸秆内丝状真菌阻止外源真菌入侵68-70
• 4.4 筛选到既能降解秸秆又能促进玉米苗期生长的真菌70-71
• 4.5 灭菌秸秆的发酵效果71
• 4.6 利用微生物降解秸秆促进还田存在的问题71-74
• 4.7 本研究待续工作探讨74-76
• 5 结论76-78
• 致谢78-79
• 参考文献79-91
• 附录91-95
• 攻读学位期间发表的学术论文95

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