维药榅桲籽二氯甲烷提取物对哮喘大鼠气道炎症与嗜酸性粒细胞凋亡的影响

【摘要】：目的:建立哮喘动物模型,从组织、细胞形态及分子水平变化探究榅桲籽二氯甲烷提取物(Qs-E)对哮喘大鼠气道炎症、嗜酸性粒细胞凋亡及调控基因表达的影响。方法:将健康雄性SD大鼠72只,随机分为:正常对照组、哮喘模型组、地塞米松阳性对照组、Qs-E低剂量组、Qs-E中剂量组、Qs-E高剂量组,每组12只。除了正常对照组外,其余各组以卵清蛋白(OVA)刺激及致敏的方法建立哮喘大鼠模型。正常对照组以磷酸盐缓冲液(PBS)代替进行致敏,分别给予药物干预,末次给药后处死动物,采集标本。显微镜观察支气管肺组织形态学的改变,用SYSMEX全自动血细胞分析仪(动物专用)计数肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞(WBC)及嗜酸性粒细胞(EOS)个数,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织匀浆液中的白介素4和5(IL-4、IL-5)、白三烯B4(LTB4)、总免疫球蛋白、特异性面免疫球蛋白(IgE)含量,硝酸氧化酶还原法检测肺组织一氧化氮(NO)含量,凝血酶适体显色法检测肺组织丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,还原性谷胱甘肽对过氧化氢的还原法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,SP免疫组织化学方法检测肺组织中环氧合酶-2(COX-2)和脂氧合酶-5(5-LOX)含量及分布,TUNEL法检测肺组织中EOS凋亡,原位杂交法检测肺组织Fas、Bcl-2的表达。相关的实验数据用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。结果:(1)与正常对照组比较,哮喘模型组肺组织中有大量的EOS、淋巴细胞等炎症细胞浸润,IL-4、IL-5、特异性IgE、总IgE、LTB4、NO及MDA含量升高,GSH-PX、SOD活力降低,COX-2及5-LOX高表达,Fas低表达和Bc1-2高表达,EOS凋亡减少,说明哮喘模型在气道存在炎症细胞聚集,炎症因子产生增多,氧化应激反应升高及EOS凋亡不足的病理状态,该实验动物模型建立成功;(2)与哮喘模型组比较,Qs-E降低BALF中白细胞及EOS数量,IgE、IL-5、IL-4、LTB4等炎症因子降低肺组织中NO、MDA等氧化自由基的含量而间接的增强了SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性,抑制COX-2及5-LOX的表达,促进肺组织Fas表达、抑制Bcl-2表达,促进肺组织EOS凋亡。各治疗组间疗效比较,其中榅桲籽高剂量组总体疗效最为显著。结论:维药Qs-E通过促进细胞凋亡,抑制炎症因子产生的途径,改善哮喘大鼠的肺功能,减轻气道炎症,发挥抗炎、平喘作用,从而达到一定的干预目的。其中Qs-E高剂量组与低剂量组比较,GSH-PX等指标活性显著升高,存在剂量依赖关系。 【关键词】：榅桲籽二氯甲烷提取物 哮喘 抗炎 细胞凋亡
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R29
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-16
• 研究内容与方法16-24
• 1 研究对象及实验材料16-18
• 1.1 研究对象16
• 1.2 试剂16-17
• 1.3 仪器17-18
• 2 实验内容与方法18-23
• 2.1 哮喘大鼠动物模型的建立18
• 2.2 榅桲籽二氯甲烷提取部位对哮喘大鼠气道炎症的影响18-21
• 2.3 榅桲籽二氯甲烷提取部位对哮喘大鼠细胞凋亡及调控基因表达的影响21-23
• 3 统计学分析23-24
• 结果24-30
• 讨论30-37
• 小结37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 附图43-46
• 综述46-52
• 参考文献50-52
• 攻读硕士期间发表的学位论文52-53
• 导师评阅表53

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