活性污泥中甲烷菌的研究
活性污泥中甲烷菌的研究【摘要】:一、探讨污泥干化芦苇床稳定化污泥中甲烷氧化菌多样性,利用PCR-DGGE技术分析不同时期、不同干化床污泥中甲烷氧化菌群落变化。通过对DGGE图谱的聚
【学位授予单位】:大连工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:X703;X172
【目录】:
- 摘要4-5
- Abstract5-10
- 第一章 绪论10-19
- 1.1 研究背景10
- 1.2 甲烷菌的简介10-16
- 1.2.1 产甲烷菌11-13
- 1.2.1.1 产甲烷菌研究进展和生长环境11-12
- 1.2.1.2 产甲烷菌的分类和多样性和生理12-13
- 1.2.1.3 产甲烷菌合成甲烷途径13
- 1.2.2 甲烷氧化菌13-16
- 1.2.2.1 甲烷氧化菌特征酶14-16
- 1.2.2.2 甲烷氧化菌的形态与分类16
- 1.2.2.3 甲烷氧化的途径16
- 1.3 产甲烷菌和甲烷氧化菌的潜在应用价值16
- 1.4 聚合酶链式反应(PCR)16-17
- 1.5 降落PCR17
- 1.6 本课题研究工作17-19
- 1.6.1 本课题研究内容17-18
- 1.6.2 本课题研究意义18-19
- 第二章 基于PMOA基因分析污泥干化芦苇床中甲烷氧化菌的多样性19-30
- 2.1 实验材料19-21
- 2.1.1 样品采集19
- 2.1.2 实验试剂19-20
- 2.1.3 实验仪器20-21
- 2.1.4 溶液配制21
- 2.2 实验方法21-23
- 2.2.1 样品DNA提取21-22
- 2.2.2 样品DNA纯化22
- 2.2.3 PMOA基因PCR扩增22
- 2.2.4 PCR-DGGE条件22
- 2.2.5 切胶和测序22-23
- 2.2.6 DGGE图谱分析和数据处理23
- 2.2.7 DGGE图谱聚类分析23
- 2.2.8 系统发育树的构建23
- 2.3 结果与讨论23-29
- 2.3.1 总DNA的提取23-24
- 2.3.2 基于PMOA基因PCR扩增24-25
- 2.3.3 引物带有GC-夹进行PCR扩增25-26
- 2.3.4 D GGE图谱分析26-28
- 2.3.5 多样性指数分析28
- 2.3.6 DGGE图谱聚类分析28-29
- 2.4 本章小结29-30
- 第三章 污泥干化芦苇床中甲烷氧化菌的分离与鉴定30-38
- 3.1 实验材料30-31
- 3.1.1 污泥样品采集30
- 3.1.2 实验试剂30-31
- 3.1.3 实验仪器31
- 3.2 实验方法31-33
- 3.2.1 培养基配制31
- 3.2.2 甲烷氧化菌的筛选31-32
- 3.2.2.1 污泥样品的预处理31
- 3.2.2.2 甲烷氧化菌的分离与纯化31-32
- 3.2.3 菌株的形态观察32
- 3.2.4 甲烷气体分析方法32
- 3.2.5 16SRDNA分析和构建发育树32-33
- 3.2.5.1 菌体DNA提取32
- 3.2.5.2 16SRDNA PCR扩增32-33
- 3.2.5.3 构建系统发育树33
- 3.3 结果与讨论33-37
- 3.3.1 菌体形态33-34
- 3.3.2 甲烷浓度34
- 3.3.3 菌体的DNA34
- 3.3.4 16SRDNA PCR扩增34-35
- 3.3.5 系统发育树的构建35-37
- 3.4 本章小结37-38
- 第四章 产甲烷菌的分离与鉴定38-46
- 4.1 实验材料38-39
- 4.1.1 污泥样品采集38
- 4.1.2 实验试剂38
- 4.1.3 实验仪器38-39
- 4.2 实验方法39-42
- 4.2.1 培养基配制39
- 4.2.2 产甲烷菌的筛选39-40
- 4.2.2.1 污泥样品的预处理39
- 4.2.2.2 产甲烷菌培养39-40
- 4.2.2.3 产气实验40
- 4.2.2.4 形态观察和倒置荧光显微镜观察40
- 4.2.2.5 扩大培养40
- 4.2.3 菌体DNA的提取40-41
- 4.2.4 16SRDNA PCR扩增41-42
- 4.2.5 构建系统发育树42
- 4.3 结果与讨论42-45
- 4.3.1 产气实验42
- 4.3.2 倒置荧光显微镜观察42-43
- 4.3.3 16SRDNA PCR扩增43-44
- 4.3.4 构建系统发育树44-45
- 4.4 本章小结45-46
- 第五章 结论46-47
- 参考文献47-50
- 致谢50
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