甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分的纯化和性质

【摘要】：Methylomonassp．GYJ3菌株中经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析和SephacrylS300凝胶层析分离纯化出甲烷加氧酶羟基化酶组分．经HPLC分析，纯度大于90％，分子量为240kD，纯化倍数为3．9，比活为225nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白．SDS-PAGE表明，羟基化酶由三个亚基组成，亚基分子量为56、43、27kD．ICPAES测定羟基化酶的Fe含量为2.1molFe每摩尔蛋白．HPLC法用于甲烷单加氧酶羟基化酶组分的纯化，纯化的羟基化酶组分比活为541nmol（环氧丙烷）每分钟毫克蛋白，是两步LC法纯化的羟基化酶的两倍，Fe含量为3．78molFe每摩尔蛋白．催化性质研究表明羟基化酶能够被化学还原剂还原为还原态羟基化酶，还原态的羟基化酶单独存在时表现出MMO活性，说明它是MMO活性中心，天然态的羟基化酶单独存在时无MMO活性，加入粗酶液中MMO活性明显增加，说明GYJ3菌中MMO是一个复合酶系． 【作者单位】： 中科院兰州化学物理研究所羰基合成与选择氧化国家重点实验室!兰州 730000 中国科学院生理物理研究所生物大分子国家重点实验室!北京 100101 中国科学院生理物理研究所生物大分子国家重点实验室!北京 100101 中国科学院生理物理研究所生物大分子国家重点实验室!北京 100101
【关键词】： 甲基单胞菌 甲烷利用细菌 甲烷单加氧酶 羟基化酶
【基金】：国家自然学基金!29471030 中科院”八五”重点应用项目!KM85-02
【分类号】：Q55
【正文快照】： 甲烷单加氧酶（EC．1．14．13．25，methanemonooxygenase，MM（））是甲烷利用细菌（methanotrophicbacteria）代谢过程中的重要酶系，在细菌细胞内MMO直接利用分子氧作为底物催化甲烷氧化成甲醇．MMO能够催化烷烃羟基化反应和烯烃环氧化反应，因此，它是一种具有应用前景的

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