瘤胃甲烷生成菌PCR反应条件的优化

【摘要】：[目的]优化适合于瘤胃甲烷生成菌的PCR反应体系。[方法]以1.5周岁健康的藏系绵羯羊瘤胃内容物总DNA为模板,用特异性引物对甲烷生成菌16SrDNA保守序列进行PCR扩增,并通过改变PCR反应体系中的各参数,优化其PCR反应体系中的相关参数。[结果]PCR最优程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,51℃退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃后延伸7 min。优化后的PCR反应体系为:5.00μl缓冲液,4.00μl d-NTP,2.00μl引物(前引物和后引物各1.00μl),4.00μl MgCl2,0.25μlTaqDNA聚合酶和1.00μl 1∶100倍稀释的DNA模板,然后加水补足25.00μl。[结论]该研究为瘤胃甲烷生成菌功能的研究奠定了基础。 【作者单位】： 江苏畜牧兽医职业技术学院;甘肃农业大学生物技术工程学院;兰州大学草地农业科技学院甘肃草原生态研究所;兰州大学青藏高原生态系统管理国际中心;
【关键词】： 甲烷生成菌 SrDNA PCR反应条件 优化
【基金】：国家自然科学基金重点项目(30730069)
【分类号】：S852.6
【正文快照】： 产甲烷菌是一类能将无机或有机化合物进行厌氧发酵转化成甲烷和二氧化碳的古细菌,生活在各种自然环境及一些极端的环境中,如有机废弃物处理、沼气发酵、反刍动物的瘤胃中。研究表明,甲烷是与全球气候变化密切相关的温室气体,而反刍家畜是农业温室气体释放的一个主要来源。为

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