颗粒状甲烷单加氧酶异源表达方法

【摘要】：由于甲烷氧化菌只能利用甲烷作为唯一的碳源和能源,存在生长缓慢、细胞密度低、培养困难等问题,限制了其工业应用。解决该问题的有效途径之一是在容易实现高密度培养的异源宿主菌中表达甲烷单加氧酶(Methane monooxygenase,MMO)。本实验室前期首次在一种红球菌中成功地表达了来自于甲烷氧化菌(Methylosinus trichosporium)OB3b的pMMO(颗粒状甲烷单加氧酶),但比酶活较原始菌低很多。本实验在该结果的基础上,通过选用不同的启动子和宿主细胞探索表达pMMO的可能性,结果得到了具有氧化甲烷活性的重组菌,但是产物检测到乙醇的生成,且该重组菌的pMMO活性不稳定,暗示pMMO的催化特性可能发生了变化。另外,很多重组菌检测到pMMO蛋白的表达,但没有催化活性,说明pMMO在宿主细胞中的正确组装是其功能表达的关键。 【作者单位】： 清华大学化工系生物化工研究所;中国农业科学院研究生院;
【关键词】： 甲烷氧化菌 颗粒状甲烷单加氧酶 异源表达 生物催化
【基金】：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2006AA02Z203) 国家自然科学基金项目(No.20676071)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 甲烷是一种重要的一碳化合物,如果能够利用甲烷来生产化工产品,不仅可以缓解石油资源日益减少的危机,同时也可以减少其对大气造成的温室效应。但是,由于甲烷结构非常稳定,虽然经过长期的工艺改进和催化剂改良,目前工业上从甲烷生产甲醇仍需要255 oC的高温和5~15 MPa的高压这

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