石油烃降解产甲烷菌系DNA提取方法比较研究

【摘要】：基因组DNA提取方法是评价微生物种群多样性的关键因素,文章研究了不同提取方法对石油烃降解产甲烷菌群结构的影响。分别采用如下五种方法提取纯化DNA:方法 I:玻璃珠振荡破壁、Tris平衡酚(pH值8.0)、氯仿、异戊醇提取,Promega试剂盒纯化法;方法 II:玻璃珠振荡破壁,水饱和酚(pH值5.2)、氯仿、异戊醇提取,Promega试剂盒纯化法;方法 III:进口试剂盒1+核酸自动提取仪法,方法 IV:玻璃珠振荡破壁,核酸自动提取仪提取法;方法 V:国产试剂盒提取法。通过末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)分析细菌和古菌群落结构组成。采用不同方法获得的细菌和古菌的主要菌群结构类似,但是相对丰度存在差异。 【作者单位】： 农业部沼气科学研究所;农业部农村可再生能源开发利用重点实验室;
【关键词】： 基因组DNA提取方法 烃降解产甲烷菌系 微生物群落
【基金】：国家“863”项目(2013aa064401) 四川省国际科技合作与交流计划项目(2013HH0018)
【分类号】：Q93-3
【正文快照】： 环境中存在着丰富的微生物资源,然而仅有1%~10%的微生物可以在实验室进行纯培养[1-3]。而基于未培养的微生物分子生态学技术成为当前研究环境微生物群落结构与功能多样性的重要手段之一。主要步骤是提取总的基因组DNA,经纯化后进行PCR扩增,再通过DGGE(变性梯度凝胶电泳)、T-RF

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